วิเคราะห์ PCR: มันคืออะไร? วิธีการใช้การวิเคราะห์ PCR

มันไม่นานที่ผ่านมาการพัฒนาวิธีการน่าเชื่อถือและมีความไวสูงและรวดเร็วสำหรับการวินิจฉัยโรคติดเชื้อต่างๆในมนุษย์ วิธีดังกล่าวเรียกว่า "การวิเคราะห์ PCR" สิ่งที่มันเป็นสิ่งที่เป็น สาระสำคัญของสิ่งที่เขาสามารถระบุจุลินทรีย์และวิธีการใช้มันเราจะอธิบายในบทความนี้

ประวัติความเป็นมาของการค้นพบ

คิดค้นวิธี polymerase chain reaction (PCR) เป็นนักวิทยาศาสตร์อเมริกัน Keri Myullis ในปี 1983 ในขั้นต้นที่จดสิทธิบัตร วิธีการวินิจฉัย ด้วย "เซตุสคอร์ปอเรชั่น" ที่เขาทำงานและผู้สร้าง แต่ในปี 1992 สิทธิและสิทธิบัตรทั้งหมดถูกขายให้กับ บริษัท "ฮอฟแมน La Roche." หลังจากนั้นก็เปิดออกที่คล้ายศึกษาได้ดำเนินการในแบบคู่ขนานและได้รับรายงานจากนักชีววิทยาสหรัฐอื่น ๆ เช่นเอลิสเฉิน, เดวิดเอ็ดการ์, จอห์น rre ในปี 1980 เขามีส่วนร่วมในเรื่องนี้และนักวิทยาศาสตร์ของสหภาพโซเวียตเอ Slyusarenko A. Kaledin และ S โกโรเดตสกี ดังนั้นเพื่อตรวจสอบเจ้าของลิขสิทธิ์ แต่เพียงผู้เดียวยังไม่ได้รับเป็นไปได้ ชีวเคมีที่โดดเด่นหลายคนมีส่วนร่วมในการพัฒนาวิธีการของการเกิดปฏิกิริยาโพลิเมอร์และเซิร์นที่จดสิทธิบัตรนวัตกรรมของพวกเขา ในการวิเคราะห์ประเด็นนี้ของ PCR จะดำเนินการทั่วทั้งห้องปฏิบัติการพิเศษพร้อม

สรุป PCR วินิจฉัย

วิเคราะห์ PCR: มันคืออะไรและวิธีการทำงานหรือไม่ สาระสำคัญของวิธีการที่อยู่ในความจริงที่ว่าด้วยการใช้ดีเอ็นเอโพลิเมอร์พิเศษเอนไซม์ในหลอดทดลองที่จะเพิ่มขึ้นในสภาพแวดล้อมของจุลินทรีย์ปริมาณที่เฉพาะเจาะจง การทำเช่นวัสดุดีเอ็นเอซ้ำ ๆ ใช้ได้คูณนี้ ดังนั้นการปรากฏตัวของเชื้อโรคในตัวอย่างจำนวนเงินที่จะเพิ่มขึ้นที่ค่าใช้จ่ายของการจัดการห้องปฏิบัติการชีวเคมีและแบคทีเรียจะไม่เป็นเรื่องยากที่จะตรวจสอบในกล้องจุลทรรศน์

คือการศึกษาของวัสดุได้อย่างไร?

เพื่อดำเนินการวิเคราะห์ที่จำเป็น:

• แม่แบบดีเอ็นเอ
• ไพรเมอร์วัสดุเชื่อมต่อปลายของชิ้นส่วน;
• ความร้อนเอนไซม์ดีเอ็นเอโพลิเมอร์;
• สารเคมีให้การดำเนินการที่เหมาะสมของเอนไซม์;
• สารละลายบัฟเฟอร์เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการสร้างสภาวะที่เหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตและการพัฒนาของวัสดุดีเอ็นเอ

เพื่อดำเนินการ PCR ทำงาน 25-30 ซ้ำประกอบด้วยสามขั้นตอนการสูญเสียสภาพธรรมชาติ, การอบและการยืดตัว

การวิเคราะห์ปฏิกิริยาลูกโซ่ polimezarnoy ใช้อุปกรณ์พิเศษ - Cycler อุปกรณ์ที่ทันสมัยช่วยให้คุณสามารถติดตั้งเครื่องทำความร้อนที่จำเป็นและท่อระบายความร้อนโปรแกรมขจัดข้อผิดพลาดในระหว่างการวินิจฉัย

สถานที่ที่จะใช้การวินิจฉัย?

Polimezarnoy วิธีปฏิกิริยาลูกโซ่ถูกนำมาใช้ในด้านต่างๆของยา:

• การใช้งานนิติเวชเพื่อระบุสารพันธุกรรมเช่นผม, น้ำลายหรือเลือด
• วิเคราะห์ PCR เลือดช่วยในการ genotyping เช่นการตรวจหาการตอบสนองต่อการปลูกแต่ละทางพันธุกรรมเพื่อเป็นยาที่เฉพาะเจาะจง;
• โดยวิธีการตั้งค่าความสัมพันธ์ในครอบครัวระหว่างผู้คน;
• ขอ-PCR วิธีการส่วนใหญ่ได้กลายเป็นในการวินิจฉัยทางการแพทย์สำหรับความมุ่งมั่นของโรคติดเชื้อต่างๆ

การติดเชื้ออะไรเผย PCR?

วิเคราะห์ PCR ดังนั้นยาที่ได้รับการใช้ประสบความสำเร็จ มันคืออะไรเราได้เรียนรู้แล้ว และเชื้อโรคบางอย่างสามารถตรวจพบได้ด้วยหรือไม่ PCR การวินิจฉัยต่อไปนี้ การติดเชื้อ :

• โรคไวรัสตับอักเสบ A, B, C;
• ureaplasmosis;
• candidiasis;
• หนองในเทียม;
• mycoplasmosis;
• ภาวะแบคทีเรีย;
• เชื้อเชื้อ;
• Trichomoniasis;
• การติดเชื้อ HPV;
• วัณโรค;
• การติดเชื้อเริมที่ 1 และประเภทที่ 2;
• Helicobacter pylori ติดเชื้อ;
• cytomegalovirus;
• โรคคอตีบ;
• เชื้อ Salmonella;
• การติดเชื้อเอดส์

นอกจากนี้วิธี PCR ถูกนำมาใช้ในการวินิจฉัยโรคมะเร็ง

ข้อดีของวิธีการ

การวิเคราะห์ PCR มีข้อดีหลายประการ:

1. ความไวสูง ถึงแม้จะมีเพียงไม่กี่โมเลกุลดีเอ็นเอจุลินทรีย์วิเคราะห์ PCR กำหนดสถานะของการติดเชื้อ มันจะช่วยให้วิธีการสำหรับการอักเสบเรื้อรังและโรคแฝงที่เกิดขึ้น มักจะอยู่ในกรณีดังกล่าวจุลินทรีย์คือรกร้างในรูปแบบอื่น
2. เพื่อที่จะตรวจสอบวัสดุที่เหมาะสมใด ๆ เช่นน้ำลายเลือดเลือกเพศ, ผม, เซลล์เยื่อบุผิว ที่พบมากที่สุดคือการทดสอบเลือดและปัสสาวะไม้กวาด PCR

3. ไม่จำเป็นต้องมีการขยายการเจริญเติบโตของวัฒนธรรม กระบวนการของการวินิจฉัยอัตโนมัติช่วยให้คุณสามารถที่จะได้รับผลของการศึกษาหลังจาก 4-5 ชั่วโมง
4. วิธีการที่เกือบจะเป็นของแท้อย่างสมบูรณ์ บันทึกกรณีแยกเฉพาะผลเชิงลบเท็จ
5. ความสามารถในการระบุหลายประเภทของเชื้อโรคในวัสดุตัวอย่างหนึ่ง นี้ไม่เพียง แต่เพิ่มความเร็วในกระบวนการของการวินิจฉัยของโรค แต่ยังช่วยลดค่าใช้จ่ายวัสดุ บ่อยครั้งที่แพทย์กำหนดการวิเคราะห์ที่ครอบคลุมของ PCR สำรวจราคาประกอบด้วยการกำหนดหกเชื้อโรคคือประมาณ 1,500 รูเบิล

คำแนะนำเกี่ยวกับการเตรียมความพร้อมสำหรับการวิเคราะห์

ผลที่ถูกต้องการศึกษา PCR ต้องมีการทดสอบตามคำแนะนำของการเตรียมการเบื้องต้นสำหรับการวินิจฉัยที่:

1. ก่อนที่จะส่งของน้ำลายควรละเว้นจากการรับประทานอาหารและยาเสพติดเป็นเวลา 4 ชั่วโมงก่อนที่จะมีการสุ่มตัวอย่างวัสดุ ทันทีก่อนขั้นตอนล้างปากของคุณด้วยน้ำต้ม
2. กฎข้างต้นจะต้องได้รับคำแนะนำและเมื่อถ่ายตัวอย่างจากด้านในของแก้ม หลังจากที่ล้างจะแนะนำให้ดำเนินการนวดเบาบนผิวที่จะปล่อยสารคัดหลั่งต่อมลูกหมากโต
3. ปัสสาวะมักจะเก็บที่บ้าน การทำเช่นนี้คุณจะต้องดำเนินการในห้องน้ำอย่างละเอียดของอวัยวะเพศ ในภาชนะพลาสติกที่ผ่านการฆ่าเชื้อที่มีความจำเป็นในการเก็บรวบรวม 50-60 มล. ของปัสสาวะ มันแนะนำสำหรับผู้หญิงที่จะใส่สำลีเข้าไปในช่องคลอดและคนมากที่สุดเท่าที่เป็นไปได้ที่จะดึงผิวพับเพื่อให้มั่นใจความบริสุทธิ์ของวัสดุ คุณไม่สามารถใช้วัสดุในช่วงมีประจำเดือน
4. สำหรับการจัดส่งของสเปิร์มที่จะงดเว้นจากการมีเพศสัมพันธ์ในช่วง 3 วันก่อนที่จะมีคอลเลกชันของวัสดุ นอกจากนี้แพทย์จะได้รับคำแนะนำให้ยกเลิกการใช้บริการห้องซาวน่าและห้องอาบน้ำร้อน, เครื่องดื่มแอลกอฮอล์และอาหารรสเผ็ด 3 ชั่วโมงก่อนที่จะมีการวิเคราะห์เป็นสิ่งจำเป็นที่จะละเว้นจากปัสสาวะ
5. ที่จะผ่านการละเลง urogenital ตัวอย่างเช่นถ้าวิเคราะห์ในหนองในเทียม PCR ทั้งผู้หญิงและผู้ชายจะแนะนำว่าส่วนที่เหลือทางเพศเป็นเวลา 3 วัน 2 สัปดาห์ก่อนการวิเคราะห์ไม่สามารถใช้ยาปฏิชีวนะ สำหรับสัปดาห์ที่คุณจำเป็นต้องหยุดการใช้เจลที่ใกล้ชิดขี้ผึ้งยาเหน็บช่องคลอดสวนล้าง 3 ชั่วโมงก่อนที่จะมีการศึกษาควรละเว้นจากปัสสาวะ ในช่วงมีประจำเดือนวัสดุรั้วไม่ได้ดำเนินการเพียง 3 วันหลังจากการสิ้นสุดของการจำสามารถใช้ smear urogenital

PCR ในระหว่างตั้งครรภ์

ระยะเวลาการรอคอยสำหรับทารก, โรคติดเชื้อหลายโรคติดต่อทางเพศสัมพันธ์เป็นอันตรายมากสำหรับการพัฒนาของทารกในครรภ์ปกติ ติดต่อทางเพศสัมพันธ์สามารถเรียกการพัฒนามดลูกเกิดการคลอดก่อนกำหนดหรือก่อนวัยอันควรจนผิดรูป แต่กำเนิดของเด็ก ดังนั้นจึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะได้รับในการตั้งครรภ์ก่อนคัดกรอง PCR ผ่านการวิเคราะห์เป็นสิ่งจำเป็นเมื่อลงทะเบียน - ถึง 12 สัปดาห์

วัสดุรั้วมาจากคลองปากมดลูกด้วยแปรงพิเศษ ขั้นตอนการรักษาและโพสท่าเป็นอันตรายต่อทารกไม่มี ตามปกติในระหว่างการตั้งครรภ์การวิเคราะห์สำหรับวิธี PCR Chlamydia เช่นเดียวกับ ureaplasmosis, mycoplasmosis, cytomegalovirus เริม papillomavirus ตรวจสอบที่ซับซ้อนเช่นที่เรียกว่า PCR 6

PCR สำหรับการตรวจวินิจฉัยโรคเอชไอวี

เนื่องจากข้อเท็จจริงที่ว่าวิธีการของการเกิดปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์มีความสำคัญมากต่อการเปลี่ยนแปลงในร่างกายและเงื่อนไขของการวินิจฉัยหลายปัจจัยส่งผลกระทบต่อผล ดังนั้นการวิเคราะห์ PCR เชื้อเอชไอวีไม่ได้เป็นวิธีการที่น่าเชื่อถือและประสิทธิภาพในการใช้ - 96-98% ส่วนที่เหลืออีก 2-4% ของการทดสอบให้ผลบวกปลอม

แต่ในบางสถานการณ์ไม่มีการวินิจฉัย PCR ของเอชไอวีไม่สามารถทำ ปกติก็จะดำเนินการกับคนที่เป็นเท็จลบ ELISA ตัวเลขเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าคนที่ไม่ได้พัฒนาเลยแอนติบอดีต่อเชื้อไวรัสและไม่สามารถตรวจพบได้โดยไม่ต้องเพิ่มจำนวนหลาย ที่ว่านี้สามารถทำได้โดยการดำเนินการทดสอบเลือดวิธี PCR

จำเป็นนอกจากนี้ยังมีการวินิจฉัยของเด็กปีแรกของชีวิตที่เกิดจากมารดาที่ติดเชื้อ HIV วิธีการคือวิธีเดียวที่จะเชื่อถือได้ตรวจสอบสถานะของเด็ก

PCR สำหรับการวินิจฉัยโรคตับอักเสบ

Polymerase วิธีปฏิกิริยาลูกโซ่ช่วยให้การตรวจสอบดีเอ็นเอของไวรัสตับอักเสบ A, B, C, ดีก่อนการก่อตัวของแอนติบอดีต่อการติดเชื้อหรืออาการเริ่มมีอาการ โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่มีประสิทธิภาพคือการวิเคราะห์ PCR ในไวรัสตับอักเสบซีตั้งแต่ 85% ของการเกิดโรคดังกล่าวจะไม่มีอาการและการรักษาทันเวลาโดยไม่ต้องกลายเป็นเรื้อรัง

ตรวจสอบเวลาของเชื้อโรคจะช่วยหลีกเลี่ยงภาวะแทรกซ้อนและการรักษาระยะยาว

การตรวจคัดกรองแบบบูรณาการวิธี PCR

ครอบคลุม PCR วิเคราะห์: มันคืออะไร? นี้ วิธีการตรวจคัดกรอง polimezarnoy ปฏิกิริยาลูกโซ่ซึ่งรวมถึงการพิจารณาการติดเชื้อชนิดพร้อมกันหลาย Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealitikum, 1 เริมและประเภทที่ 2 papillomavirus โรคหนองใน ราคาของการวินิจฉัยโรคนี้มีตั้งแต่ 2,000 ถึง 3,500 รูเบิล ขึ้นอยู่กับคลินิกวัสดุและอุปกรณ์เช่นเดียวกับประเภทของการวิเคราะห์: คุณภาพหรือเชิงปริมาณ สิ่งที่จำเป็นในกรณีของคุณ - แพทย์ตัดสินใจ ในบางกรณีคุณเพียงแค่ตรวจสอบสถานะของการติดเชื้อในคนอื่น ๆ เช่นเอชไอวีที่มีบทบาทสำคัญต่อการก่อการเชิงปริมาณ เรียกว่า "การวิเคราะห์ PCR ของ 12" ในการวินิจฉัยทั้งหมดของการตรวจสอบเชื้อโรคดังกล่าวข้างต้น

ถอดรหัสผลการวิเคราะห์

วิเคราะห์ถอดความ PCR ตรงไปตรงมา มีเพียง 2 ดัชนีขนาดมี - "เชิงลบ" "บวก" และ เมื่อการตรวจสอบของเชื้อโรคสามารถแพทย์ที่มีความเชื่อมั่น 99% -th ยืนยันการปรากฏตัวของโรคและการเริ่มต้นการรักษาของผู้ป่วย ในวิธีการเชิงปริมาณของการติดเชื้อในการกำหนดจำนวนดัชนีคอลัมน์ที่เกี่ยวข้องของเชื้อแบคทีเรียที่ตรวจพบจะถูกระบุไว้ เฉพาะแพทย์สามารถกำหนดขอบเขตของโรคและกำหนดรักษาที่จำเป็น

ในบางกรณีเช่นในการพิจารณาการติดเชื้อเอชไอวีโดยวิธี PCR ที่มีผลในเชิงลบที่มีความจำเป็นสำหรับการสำรวจเพิ่มเติมเพื่อยืนยันตัวเลขเหล่านี้

ที่จะได้รับการทดสอบ?

ไหนผ่าน-PCR วิเคราะห์ในคลินิกของรัฐหรือห้องปฏิบัติการเอกชน? แต่น่าเสียดายที่ในอุปกรณ์ที่สถาบันการแพทย์เทศบาลและวิธีการที่มักจะล้าสมัย ดังนั้นมันจะดีกว่าที่จะให้การตั้งค่าส่วนตัวห้องปฏิบัติการด้วยอุปกรณ์ที่ทันสมัยและบุคลากรที่มีคุณภาพสูง นอกจากนี้ในคลินิกเอกชนคุณได้รับผลได้เร็วขึ้นมาก

ในมอสโก, ห้องปฏิบัติการเอกชนจำนวนมากมีการวิเคราะห์ PCR สำหรับการติดเชื้อต่างๆ ยกตัวอย่างเช่นในคลินิกเช่น "Vita", "แบบบูรณาการคลินิก", "ครอบครัวสุขสันต์", "Uro-Pro" ดำเนินการวิเคราะห์ PCR ราคาที่สำรวจ 200 รูเบิล สำหรับการกำหนดเชื้อโรค

มันสามารถสรุปได้ว่าการวินิจฉัยของโรคติดเชื้อโดยวิธี PCR ในกรณีส่วนใหญ่เป็นวิธีที่รวดเร็วและเชื่อถือได้ในการตรวจหาการติดเชื้อในร่างกายอยู่ในช่วงแรกของการติดเชื้อ แต่ในบางกรณีที่จะเลือกวิธีการอื่น ๆ ของการวินิจฉัย ตรวจสอบความจำเป็นในการศึกษาดังกล่าวสามารถเป็นผู้เชี่ยวชาญที่ วิเคราะห์ PCR ถอดรหัสยังต้องมีความเป็นมืออาชีพ ปฏิบัติตามคำแนะนำของแพทย์และไม่ให้การทดสอบของตัวเองซึ่งไม่จำเป็นต้องใช้